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Equipos y/o aparatos de laboratorio

El espectrofot align=left>Uno de los instrumentos principales del laboratorio de biolog celular es el espectrofot Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocrom (de un largo de onda particular) a trav de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y graficar estos valores en funci del largo de onda, formando un espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales distintas sustancias producen distintos espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga caracter Al ser expuestos a la luz del especrofot algunos electrones de los que forman las mol absorben energ entrando a un estado alterado. Al recuperar su estado original, la energ absorbida es emitida en forma de fotones. Esa emisi de fotones es distinta para cada sustancia, generando un patron particular, que var con el largo de onda usado. La concentraci es proporcional

a la absorbancia, seg la Ley Beer Lambert: a mayor cantidad de mol presentes en la muestra, mayor ser la cantidad de energ absorbida

por sus electrones.

C: concentraci align=left>L: distancia que viaja la luz a traves de la muestra. (normalmente es de 1 cm)

La cuveta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas de un cent (L). La ecuaci describe una l recta, donde el origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K, podemos calcular C en base a Abs:

El espectrofot mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotogr donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de tramitancia. Podemos usar esta unidad o cambiarla a absorbancia usando la siguiente ecuaci align=center>%T = Log Abs.

El espectrofot nos puede dar ambos valores a la misma vez, ahorrando la necesidad de hacer los c (Tramitancia= cantidad de luz que atravieza la mezcla).

Una caracter del instrumento es la necesidad de “blanquear” el aparato antes de cada lectura. Esto se hace colocando una cuveta con una soluci control que tenga todos los componentes de la reacci menos la sustancia que va a ser medida en el instrumento y ajustando la lectura a cero absorbancia. El prop de esto es eliminar el registro de absorbancia (background) que puedan presentar los dem componentes de la reacci a ese largo de onda particular. Todas las mol presentan absorbancia porque todas interfieren con el paso de la luz. S que la absorbancia ser a un largo de onda de luz espec para cada tipo de sustancia.

Las cuvetas son unos viales de pl transparente o cuarzo que dejan pasar la luz. Los mejores para trabajos de investigaci son las de cuarzo porque su interferencia al paso de la luz es m Son m costosas inicialmente pero bien tratadas pueden ser reusables. Las de pl vienen con distintas caracter Por lo general son desechables, aunque pueden reusarse. El tipo de cuveta pl a usar depende del rango de luz en el que se van a analizar las muestras. Vienen unas para luz visible, que son las m econ y otras para el rango de visible a ultravioleta. Estas son m vers align=left>Ambos tipos de cuvetas deben manejarse con cuidado para evitar rallazos sobre la superficie por donde pasa la luz. Si la cuveta est rallada, los rayos de luz que incidan en la zona se difractan y no pasan por la muestra, por lo que puede dar lecturas de absorbancia err Esto es especialmente cr cuando queremos determinar concentraci en una muestra. Antes de tomar una lectura, debemos observar que la cuveta no tenga rallazos ni est sucia. Si se ven marcas de polvo u otro tipo de sucio la cuveta debe limpiarse con papel tis (Kimwipes). Si la cuveta se manipula mucho, debemos sostenerla usando papel tis para evitar pegarle los aceites que normalmente tenemos en las manos. No debemos usar ning otro tipo de papel para limpiar las cuvetas, puesto que pueden soltar fibras que pudieran caer en la muestra o rallar la superficie.

Las cuvetas viene en distintos vol desde 1 ml hasta 4 ml. El volumen a escoger depende de la cantidad de muestra disponible. Si la muestra disponible es poca o dif de conseguir, lo mejor es usar una cuveta de menor volumen para perder la menor cantidad posible de la muestra. Por lo general, la muestra utilizada para hacer la lectura se pierde, sobre todo si es una sustancia bien sensitiva, como el ADN.

Usamos las pipetas para medir vol de l de forma m precisa que con una probeta. Y son m vers sobre todo al manejar vol peque align=left>Las pipetas de bulbo son para medir vol que no requieren de mucha presici Antes se usaban pipetas “Pasteur” de cristal a las que se les aditaba un bulbo de goma que se usaba para succionar el l Ahora vienen en pl desechable de una sola pieza y se consiguen con o sin calibraci align=left>Las pipetas volum vienen en distintos tama desde 1 ml hasta 200 ml,
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y con distintas formas, de acuerdo al uso que se les d Tambi vienen en distintos materiales como borosilicato y pl desechables o reusables, est o sin esterilizar. Algunas pueden ser esterilizadas en horno o autoclave. Para llenarlas se pueden usar bulbos de caucho, bombas manuales o el o equipos de llenado. Las bombas el y los equipos de llenado son muy si se est trabajando con m muestras, pues minimizan la fatiga del t align=left>Las micropipetas son extremadamente en los laboratorios de biotecnolog Estas permiten medir con presici vol tan peque como 0.1l hasta 1 ml. Estas requieren de unos pipeteadores especiales que deben der tratados con mucho cuidado para evitar que se descalibren. Los pipeteadores vienen de distintos tipos. La mayor pueden servir muestras individuales. Pero vienen los que pueden servir muestras m por medio de multicanales: pipetas que sirven 8 o 12 muestras a la vez. Estas son muy al hacer pruebas de ELISA, donde se practican diluciones seriadas multiples, o para preparar reacciones de varias muestras distintas a la vez. Se usan en conjunto con platos de fosas m align=left>Las puntas de micropipetas vienen con distintas caracter de acuerdo al uso que se les d Vienen con punta ancha, estrecha o aplanada, con o sin filtros contra aerosoles, est o sin esterilizar y pueden ser esterilizadas en autoclave.

Estos son unas c que contienen un circuito el expuesto a un l electrol llamado amortiguador. El aparato se usa para separar mezclas de mol grandes de acuerdo a su carga y/o su tama La t consiste en inocular la muestra en un medio semis la fase estacionaria, que se somete a un campo el en una c donde en un extremo se encuentra un filamento que act como polo positivo, y en el extremo opuesto hay otro filamento formando el polo negativo. Las mol con cargas netas positivas se mover hacia el polo negativo y las de carga negativa se ir hacia el polo positivo. Luego de la muestra ser tratada apropiadamente dependiendo del tipo de electroforesis, las mol que viajen hacia uno de los polos se separar por tama viajando m en la fase estacionaria las mol m peque El tipo y concentraci de la fase estacionaria depender del tipo de mol que nos interesa correr.

Son muy para precipitar c y mol Vienen en distintos tama y con distintas capacidades en el manejo de muestras. Este aparato somete la muestra a fuerzas de aceleraci que obligan a las mol a concentrarse en el fondo del envase utilizado, separ del medio en que se encuentran. Incluso, bajo ciertos m se puede generar un gradiente de concentraciones dentro del mismo tubo, separando distintas mol a distintos niveles o fases dentro del tubo. Con ayuda de jeringas, se puede perforar la pared del tubo y extraer del mismo s aquella fase donde se encuentren las mol de inter align=left>Entre las centr que usaremos durante el semestre est la centr refrigerada, que nos va a permitir separar c de los medios de cultivo. El rotor de esta centrifuga puede sostener tubos de 50 ml, pero puede ser intercambiado por rotores que sostienen botellas de cultivo.

La microcentr es una versi m peque de la descrita anteriormente. Es compacta, se coloca sobre la mesa y procesa muestras de hasta 2 ml. Es muy para precipitar ADN y otras sustancias que se trabajan en vol peque align=left>Equipo de cromatograf align=center>

Haremos varias cromatografias al final del semestre. En una cromatograf buscamos separar uno o varios tipos de mol relativamentre peque de una mezcla de sustancias o para purificar muestras. Existen varios tipos de cromatograf La que se utilice depender del tipo de mol que buscamos aislar.

La cromatograf de capa fina es ideal para separar muestras peque Presenta dos componentes: una fase estacionaria y una fase m La fase estacionaria consiste de una placa de vidrio o celulosa impregnada con polvo de silicato (vidrio molido extremadamente fino). Las muestras se colocan a un cent del borde inferior y se coloca en un tanque de revelado que contiene algun tipo de solvente en el fondo. La placa se coloca de forma que el solvente no toque directamente las muestras. La fase m consiste del solvente. El solvente a usarse depender de las propiedades qu de los componentes de la mezcla.

El solvente sube por capilaridad por la superficie impregnada con las muestras. Los componentes de la mezcla comenzar a migrar, seg el grado de afinidad que tengan por el solvente y/o la fase estacionaria. Mientras m af sea alg componente a la fase m m r se mover y m lejos llegar en su migraci sobre la fase estacionaria.

En la cromatograf de columna se pueden separar vol m grandes de muestras. Tambien tiene una fase estacionaria que consiste de un tubo conteniendo un material que separa la mezcla analizada. Los amortiguadores que se usan para lavar la columna constituyen la fase m align=left>El empaque de las columnas puede separar mol por su tama por sus interacciones i o por interacciones hidrof El tipo de empaque a usar depender de las propiedades de la muestra.

Existen otros tipos de cromatograf m sofisticados, que se usan en laboratorios de investigaci y en procesos de manufactura en varios tipos de industrias. Nosotros nos limitaremos a los descritos anteriormente.

es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado peque para ser vistos a simple vista. El tipo m com y el primero que se invent es el microscopio Se trata de un instrumento que contiene dos o m lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracci Lacienciaque investiga los objetos peque utilizando este instrumento se llamamicroscop align=left>Etiquetas para colocar a los reactivos

La pureza de los reactivos es fundamental para la exactitud que se obtiene en cualquier an En el laboratorio se dispone de distintos tipos de reactivos (s l o disoluciones preparadas) tal y como se comercializan.

En general, las casas comerciales ofrecen un mismo producto con varias calidades. Es importante que cuando seleccionemos un reactivo su calidad est en concordancia con el uso que se le va a dar.

2.1. Clasificaci align=left>En el laboratorio de an se utilizan reactivos de calidad anal que se producen comercialmente con un alto grado de pureza. En las etiquetas de los frascos se relacionan los l m de impurezas permitidas por las especificaciones para la calidad del reactivo o los resultados del an para las distintas impurezas. Dentro de los reactivos anal pueden distinguirse tres calidades distintas:

Reactivos para an (PA):Son aquellos cuyo contenido en impurezas no rebasa el n m de sustancias determinables por el m que se utilice.
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